במחקר שפורסם לאחרונה ב- כתב עת וירולוגיה, קבוצת חוקרים העריכה את היעילות האנטי-ויראלית והפוטנציאל הטיפולי של הרמול בטיפול בדלקת קרטיטיס הנגרמת על ידי נגיף הרפס סימפלקס מסוג 1 (HSV-1), כולל זנים עמידים לתרופות, ואת יכולתו לשפר את ההשפעות של אציקלוביר (ACV).
לימוד: הרמול משמש לטיפול בדלקת קרטיטיס הנגרמת על ידי נגיף הרפס סימפלקס. קרדיט תמונה: STEKLO/Shutterstock.com
רקע כללי
הרפס סימפלקס קרטיטיס (HSK) הוא דלקת עיניים שכיחה המאופיינת בפגיעה בקרנית, המובילה לאטימות ולפגיעה בראייה. השכיחות של HSK היא 10-30 ל-100,000 במדינות מפותחות ומעלה באזורים מתפתחים.
HSK לא מטופל עלול לגרום לעיוורון ודלקת מוח שעלולה להיות קטלנית. זה קשור בעיקר לזיהום HSV-1. ACV הוא הטיפול הסטנדרטי, אך עלייה בעמידות לתרופות, במיוחד בחולים עם דכאי חיסון, מחייבת טיפולים חדשים.
הרמול, אלקלואיד β-קרבולין המצוי במספר צמחי מרפא, הראה תכונות אנטי-ויראליות. דרוש מחקר נוסף כדי להבין היטב את מנגנוני הפעולה של הרמול, לייעל את הפוטנציאל הטיפולי שלו ולהעריך את הבטיחות והיעילות שלו לטווח ארוך באוכלוסיות חולים מגוונות.
לגבי המחקר
תאי Vero מ-American Type Culture Collection (ATCC) נשמרו במדיום של Dulbecco שונה של Eagle's (DMEM) עם 10% סרום בקר עוברי (FBS). זן HSV-1 F ו-HSV-1/153 עמיד ל-ACV סופקו בבית החולים Jingling, סין, ובתחילה בודדו במכוני גואנגג'ואו לביו-רפואה ובריאות.
זנים אלה הופצו בתאי Vero, עם סופרנטנטים שנאספו, עברו צנטריפוגה כדי להסיר פסולת, ואוחסנו ב-80 מעלות צלזיוס. טיטרים ויראליים נקבעו באמצעות המינון הזיהומי של תרבית רקמה (TCID50) בדיקה.
הרמול, שבודד מ-Peganum harmala Linn ומקורו ב-MedChemExpress, הומס ב-Dimethyl Sulphoxide (DMSO). ACV הושג מהמכונים הלאומיים לבקרת מזון ותרופות, סין.
ספריית מוצרים טבעיים עם 502 תרכובות נבדקה לאיתור פעילות אנטי-HSV-1 בעשרה מיקרומטר. תאי Vero טופלו עם Harmol או ACV, וכדאיות התא הוערכה באמצעות מבחן Cell Counting Kit 8 (CCK-8).
הריכוז הציטוטוקסי של 50% (CC50) וריכוז יעיל (EC50 ) חושבו, והראו כי Harmol מעכב באופן משמעותי זיהומים HSV-1 ו-HSV-1/153.
בדגם HSK של עכבר, עכברים מגזעים במעבדת Bagg Albino/c (BALB/c) נדבקו ב-HSV-1 או HSV-1/153 וטופלו ב-harmol או ACV.
היעילות האנטי-ויראלית הוערכה באמצעות צביעת קרנית, ניקוד בלפריטיס, בדיקת טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בזמן אמת (RTvue OCT) ומיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo. ניתוח סטטיסטי אישר את הפעילות האנטי-ויראלית המשמעותית של הרמול, עם P <0.05.
תוצאות המחקר
Harmol מעכב באופן משמעותי את שכפול HSV-1. בדיקת תרכובות טבעיות באמצעות מבחן עיכוב האפקט הציטופתי (CPE) בתאי Vero זיהה 22 תרכובות עם יותר מ-75% עיכוב ויראלי. הרמול, המציג עיכוב של מעל 90%, נבחר למחקר נוסף. ה-CC שלו50 היה 242.54 מיקרומטר, עם לא-CC50 של 12.5 מיקרומטר המשמש למחקרי מבחנה. Harmol ו-ACV (1 µM) הפחיתו שניהם CPEs הקשורים ל-HSV-1.
ההשפעה האנטי-HSV-1 של Harmol אושרה על ידי מדידת Glycoprotein D של ביטוי חלבון Herpes Simplex Virus Type 1 (gD-1). גם ACV (1 µM) וגם הרמול (0-50 µM) הפחיתו את רמות החלבון HSV-1 gD-1.
ה-EC של הרמול50 היה 9.34 µM עבור HSV-1 F ו-5.84 µM עבור HSV-1/153, עם ערכי מדד סלקטיביות (SI) של 26.0 ו-44.5, בהתאמה. הרמול הפחית ביעילות את השכפול וייצור הצאצאים של שני זני HSV-1.
שילוב של הרמול עם ACV הראה השפעות משופרות נגד HSV-1. Harmol ו-ACV עיכבו את ביטוי החומצה הריבונוקלאית (mRNA) של ה-HSV-1 F gD-1 וייצור נגיף הצאצאים בצורה יעילה יותר מכל אחד מהטיפולים לבד.
הגדלת מינונים של הרמול (0, 3.12, 6.25, 12.5 µM) הפחיתה עוד יותר את ביטוי החלבון gD, עם טיפול משולב שמראה השפעות מעולות נגד HSV-1 F. תוצאות דומות נצפו בתאים נגועים ב-HSV-1/153, מה שמצביע על כך שהרמול משפר את ההשפעה האנטי-HSV-1 של ACV, כולל על זנים עמידים ל-ACV.
ניסוי זמן של הוספה נערך כדי לקבוע את השלב שבו הרמול מפעיל את השפעותיו האנטי-ויראליות במהלך זיהום HSV-1. תאי Vero שנדבקו ב-HSV-1 טופלו בהרמול (1 מיקרומטר) בזמנים שונים לאחר ההדבקה.
מבחני שרשרת פולימראז כמותיים (qPCR) הראו שטיפול מקדים בהרמול עיכב באופן משמעותי את שכפול HSV-1, עם ירידה ביעילות שנצפתה עם זמני הוספה ממושכים.
יישום מקומי של הרמול נבדק לבטיחות על קרניות עכברים. עכברים שטופלו ב-5 μL הרמול (0.01 מ"ג/ק"ג, כ-100 μM) בימים 1, 3 ו-5 לא הראו השפעות שליליות על משקל הגוף או על שקיפות הקרנית בהשוואה לטיפול ב-PBS (Phosphate Buffered Saline).
צביעת פלואורססאין בקרנית אישרה שאין נזק לאפיתל בחמישה ימים. לפיכך, הרמול ב-0.01 מ"ג/ק"ג לא הראה רעילות לקרניות עכברים.
בדגם HSK של עכבר, טיפול בטיפות עיניים של הרמול הקל על חומרת ה-HSK. בהשוואה לעכברי HSK שלא טופלו, עכברים שטופלו בהרמול הפגינו אטימות בקרנית מופחתת, ציוני blepharitis ופגיעה מוקדמת בקרנית.
Harmol גם הקלה על ירידה במשקל הגוף כתוצאה מ-HSV-1 F. In vivo, מיקרוסקופיה קונפוקלית (IVCM) ו-RTvue OCT אישרו כי עכברים שטופלו בהרמול שמרו על שלמות מבנית עינית.
כמו כן, הוכחה היעילות של Harmol נגד HSV-1/153 עמיד ל-ACV. Harmol, אך לא ACV, הפחיתו משמעותית את ציוני הבלפריטיס ואת הנגעים המוקדמים בקרנית ומנעו ירידה במשקל בעכברים הנגועים ב-HSV-1/153. באופן קולקטיבי, הרמול נלחם ביעילות בזיהומי HSV עמידים ל-ACV in vivo.
מסקנות
לסיכום, התפתחות HSK קשורה לזיהום HSV-1, הגורם לאובדן ראייה ברחבי העולם. עמידות לתרופות עקב שימוש יתר מהווה אתגר מרכזי בבריאות הציבור, המחייבת טיפולים חדשים.
Harmol מעכב HSV-1 F ו-HSV-1/153 שכפול ברקמות הקרנית ומקל על נגעים מוקדמים הנגרמות על ידי ויראלי. זה מראה פעילות אנטי-ויראלית נגד נגיפי RNA ומשפר את ההשפעות של ACV על HSV-1, מה שמצביע על מנגנון פעולה שונה.
הרמול עשוי להפעיל אוטופגיה ולהשפיע על קינאזות 1 ו-2 (ERK1/2) ו-AMPK-Active Protein-Regulated Signal (AMPK), שהם חיוניים במאבק ב-HSV.
