במחקר שפורסם לאחרונה בכתב העת התקדמות המדע, חוקרים בבריטניה חקרו את רמות האינטרפרון-γ (IFN-γ) בדגימות דם של חולים עם מחלת וירוס קורונה ארוכה 2019 (ארוך COVID). הם מצאו כי חולים עם COVID ארוך הפגינו רמות גבוהות מתמשכת של IFN-γ מתאי דם היקפיים מונו-גרעיניים (PBMCs) המתווכים על ידי תאי T. יתרה מכך, הם מצאו ששיפור הסימפטומים נמצא בקורלציה עם ירידה בייצור IFN-γ.
מחקר: שחרור IFN-γ ספונטני, מתמשך, תלוי בתאי T בחולים שהתקדמו ל-Long Covid. קרדיט תמונה: Lightspring / Shutterstock
רקע כללי
COVID ארוך, המאופיין בסימפטומים מתמשכים ומגוונים לאחר הידבקות בתסמונת נשימתית חריפה נגיף קורונה 2 (SARS-CoV-2), חסר קריטריונים לאבחון ברורים וטיפולים מאושרים. שיעורי השכיחות משתנים מאוד בשל הגדרות שונות. חומרת הזיהום הראשוני אינה קשורה להתקדמות ל-COVID ארוך. בעוד שחלק מהמטופלים משתפרים באופן ספונטני, רבים חווים תסמינים מתמשכים או מחמירים. דיווחים אנקדוטליים מצביעים על כך שחיסון עשוי להשפיע על התקדמות הסימפטומים. זה דורש מחקר דחוף על הפתופיזיולוגיה הבסיסית וסמנים ביולוגיים פוטנציאליים של COVID ארוך. לכן, החוקרים במחקר הנוכחי ניתחו הפרשת ציטוקינים מ-PBMCs בחולי COVID ארוכים, בבקרות ובניצולי זיהום חריף כדי לחקור מנגנוני מחלה ולזהות סמנים אבחנתיים. גישה מקיפה זו ביקשה להתמודד עם אתגרי האבחון ולקדם את ההבנה של COVID ארוך.
לגבי המחקר
סך של 54 דגימות תורמים שלא נחשפו הושגו באמצעות מחקר ARIA 2019. כביקורות חיוביות, חולים מאושפזים ב-COVID גויסו לאחר תוצאת RT-qPCR חיובית (קיצור של תגובת שרשרת פולימראז הפוך) או תגובה חיובית של אינטרלוקין-2 (IL-2) לממברנה (M) ולנוקלאוקפסיד (N) ) פפטידים, או נוגדנים סרוחיוביים לחולי מחקר N. Long COVID-19 (n=55) גויסו בין אוגוסט 2020 ליולי 2021, בהתבסס על תסמינים שנמשכים לפחות חמישה חודשים לאחר COVID-19 חריף. קריטריוני ההדרה היו אבחנה חלופית המסבירה את הסימפטומים, שימוש אחרון בתרופות אימונומודולטוריות, טיפולי אנטי-TNF (קיצור של גורם נמק של גידול) עבור דלקת מפרקים שגרונית וכימותרפיה אחרונה של סרטן.
המשתתפים סיפקו 32 מ"ל של דם ורידי היקפי לניתוח, נתונים קליניים התקבלו בכל ביקור ונערכו בדיקות מעבדה. סרולוגיה של SARS-CoV-2 בוצעה באמצעות ציטומטריית זרימה מבוססת חלקיקים מרובה, תוך שימוש בחלבוני N וספייק (S) רקומביננטיים של SARS-CoV-2 וחלבוני תחום מחייב קולטן (RBD).
PBMCs התקבלו מדגימות דם באמצעות צנטריפוגה של גרדיאנט צפיפות. מונוציטים נבחרו בצורה חיובית באמצעות מיון תאים מופעל מגנטי (MACS) עם מיקרו-חרוזי CD14+, CD4+ או CD8+. מבחני FluoroSpot נערכו באמצעות נוגדנים אנושיים IFN-γ ו-IL-2 או נוגדנים אנושיים IFN-γ, TNF-α או IL-10. סך תאי החיסון בדגימות דם מלא נכמת. באמצעות ציטומטריית זרימה, PBMCs מחולים עם COVID ובקרות בריאות עברו גירוי והוערכו עבור ייצור IFN-γ וביטוי סמן הפעלה על תאי CD4+ ו-CD8+ T. הפרשת ציטוקינים ב-PBMCs מחולי COVID ארוכים ובקרות בריאות הושוו באמצעות לוחות סערת ציטוקינים של COVID-19 ומבחן אימונוסורבנט מקושר אנזים (ELISA). ניתוח סטטיסטי כלל שימוש במבחן Shapiro-Wilk, Kruskal-Wallis אנליזה חד כיוונית של שונות (ANOVA), מבחן Mann-Whitney U ו-Wilcoxon signed-rank test.
תוצאות ודיון
PBMCs מחולים עם COVID ארוך הראו אחוז גבוה יותר באופן ניכר של תאים מייצרי IFN-γ בהשוואה לדגימות ביקורת שלילית טרום-מגיפה שלא נחשפו. יתר על כן, PBMCs מאנשים עם זיהום חריף ב-SARS-CoV-2 הראו ייצור מוגבר של IFN-γ ב-28 ו-90 ימים לאחר ה-PCR, שחלפו ב-180 יום, בניגוד לשחרור מתמשך של IFN-γ בחולי COVID ארוכים מעבר ל-180 ימים. עם זאת, ייצור IL-2 נותר ללא שינוי. תפקוד תאי T בחולי COVID נשאר ללא פגע, כפי שנצפה ביכולתם לייצר תגובות IL-2 ו-IFN-γ עם גירוי עם אנטיגנים שונים, למרות ייצור IFN-γ ספונטני גבוה המשפיע על המדידות במקרים מסוימים. לא נצפה מתאם בין הייצור הספונטני של IFN-γ לבין חומרת המחלה החריפה. שחרור IFN-γ ללא גירוי נפתר בדרך כלל לאחר זיהום חריף, אך נמשך אצל אנשים שפיתחו COVID ארוך.
מבחני דלדול גילו שתאי CD14+ חיוניים לייצור IFN-γ ב-COVID ארוך, בעוד שהסרת תאי CD56+ לא הראתה השפעה משמעותית. יתרה מכך, תאי CD8+ T, עם תרומה מסוימת מתאי CD4+ T, נמצאו כמקור העיקרי של IFN-γ ב-COVID ארוך, בעיקר באינטראקציה עם תאי CD14+. נמצא כי COVID ארוך נמצא קשור לייצור מוגבר של IFN-γ, יחד עם עלייה קלה ב-TNF-α ו-IL-1β. ציטוקינים אחרים כמו IL-2, IL-10 ו-GM-CSF לא הראו שינויים משמעותיים.
מטופלים עם COVID ארוך הפגינו גם אוכלוסיות מונוציטים מוגברת, ירידה בתאי T מווסתים והפחתת תאי NKG2C+ NK (קיצור של רוצח טבעי). בנוסף, לאחר החיסון, הם הפגינו שחרור מופחת של IFN-γ ללא גירוי, המתאם עם שיפור סימפטומים ומצביע על קשר בין רמות IFN-γ לא מגורה ותסמיני COVID ארוכים.
סיכום
לסיכום, החוקרים זיהו את שחרור IFN-γ כסמן ביולוגי פוטנציאלי בחולי COVID ארוכים, והדגישו מנגנון אימונולוגי פוטנציאלי העומד בבסיס המחלה. גילוי זה יכול להודיע ולפתוח אפיקים חדשים לפיתוח התערבויות טיפוליות חדשות.
