Search
Study: RNA therapy for oncogenic NRAS-driven naevi induces apoptosis. Image Credit: Stock-Asso/Shutterstock.com

טיפול בחומצה ריבונוקלאית ממוקדת וריאנטים סיבתיים עבור nevi מלנוציטי מולד

במחקר שפורסם לאחרונה ב-The Journal of Investigative Dermatology, חוקרים פיתחו טיפול גנטי המכוון למוטציה הסיבתית NRAS c.181C>A מוטציה ב-Melanocytic naevus מולד (CMN) באמצעות חומצה ריבונוקלאית מתערבת קטנה (siRNA) כדי לדכא את הביטוי שלה ולהשרות פינוי נגעים. .

לימוד: טיפול ב-RNA עבור naevi אונקוגני המונע על ידי NRAS גורם לאפופטוזיס. קרדיט תמונה: Stock-Asso/Shutterstock.com

רקע כללי

חלבוני RAS הם קריטיים לחלוקת תאים, התמיינות ותהליכים אפופטוטיים. וריאציות RAS אונקוגניות גורמות לסרטן, אך הן יכולות גם לגרום לנגעים שפירים כגון גושים בבלוטת התריס, פוליפים במעי הגס ונאיים מלנוציטיים.

היפוך הנזקים הללו עשוי להוריד את שכיחות הסרטן, אך קשה להילחם בהשפעותיהם באמצעות מעכבי מערכת במורד הזרם. CMN חמור הוא הגורם המוביל למחלות ומוות בילדים.

מיקוד לווריאציה פתוגנית של NRAS c.181C>A, p.(Q61K) עשויה להיות אסטרטגיית רפואה מדויקת יעילה לזיהוי מסלולי התמדה במחלה.

לגבי המחקר

במחקר הנוכחי, חוקרים יצרו siRNAs המכוונים לאלל המשתנה של CMN כדי לרפא נגעים ולהציע שיטה טיפולית למניעת סרטן.

החוקרים תרביתו תאי CMN naevus משמונה ילדים עם CMN, משיגים את דגימות העור שלהם באמצעות ביופסיית אגרוף או כריתה כירורגית. הם השתמשו בסיRNA מפותח ומוטב בתאי קרצינומה של המעי הגס (HCT116) אנושיים.

הם צילמו את תאי הניבוס הראשיים מבודדים של CMN באמצעות הדמיה פטיכוגרפית כדי לנתח את צורתם והתנהגותם של תאי naevus בארבעה אנשים, וסווג אותם באמצעות למידת מכונה כתאים מזדקנים רב-קוטביים, דו-קוטביים, לא-קוטביים וגדולים מרובי-גרעינים. יתר על כן, הם ביצעו ציטומטריית זרימה ואימונוהיסטוכימיה.

החוקרים ערכו ניסויי אפופטוזיס חי והשתמשו בשתי משוואות להערכת מועמדי siRNA לאפליה אללית בסיליקו. הם ביצעו תגובת שרשרת פולימראז כמותית (PCR), ואחריה בדיקת Western blotting לניתוח.

הם ביצעו רצף RNA לכל התעתיק על תאי C6072C ו-C8052C-WT מזווגים עם ובלי siRNAs 1, 8 ו-15. הם גם בדקו את המועמד המוביל siRNA, siNRASQ61K, על תאי חולה ראשוניים. הם טיפלו בתאי naevus במינון יחיד של siNRASQ61K ובדק את התוצאות לאחר 48 שעות.

כדי להעריך מסירה in vivo, החוקרים ניתנו סיRNA בקרה מתויג Cy5 המובלע בננו-חלקיקים ממוקדי קולטן (RTNPs) תוך עורית לתוך Tyr:NRASQ61K דרמיס עכברי. הם ביצעו רצף RNA על תאי naevus ראשוניים לפני ואחרי siNRASQ61K טיפול להערכת השפעות על ומחוץ למטרה.

החוקרים חקרו את הביטוי של מווסת אפופטוזיס הנגרמת על רקע אנדופלזמי (ER), כולל רשתית אנדופלזמית לגרעין איתות 1 (ERN1), גורם ייזום תרגום אאוקריוטי 2-אלפא קינאז 3 (EIF2AK3), גורם שעתוק מפעיל 4 (ATF4), (ATF6), וחלבון מוסדר גלוקוז 78 (GRP78).

החוקרים בחנו גנים בעלי רצפי מטרה דומים וערכו ניתוחי מסלול. הם השתמשו בהפעלת Caspase-3/7 כדי להעריך אפופטוזיס בארבעה חולי נאיוווס במהלך הדמיה חיה במשך שבעה ימים.

הם השוו את siNRASQ61K יעילות הטיפול במעכבי חלבון קינאז המופעל על ידי מיטוגן (MEKi) trametinib, הטיפול הרפואי היחיד שנבדק בחולי CMN in vivo.

תוצאות

העבודה הראתה ש-siRNA המכוון לשונות הסיבתית החוזרת דיכא במידה ניכרת את NRASQ61K האונקוגני וכיום בלתי ניתן לטיפול בתאי נאבי מלנוציטיים.

טיפול ב-siRNA מוריד באופן משמעותי את רמות ה-ADP-ribosylation factor (Arl) דמוי חלבון 6 באינטראקציה חלבון 1 (ARL6IP1), מעכב מוכר של אפופטוזיס הנגרמת על ידי ER מתח שלא היה קשור בעבר ל-NRAS.

אריזת siRNA ממוקדת ב-siNRAS בהרכבה עצמיתQ61K-RTNPs מונע הידרדרות siRNA, מאפשר משלוח מוצלח של siRNA ממוקד לתוך מודל עכבר אנושי ומאפשר מתן explant עור אנושי.

ה-RTNPs גרמו להורדה סלקטיבית של NRAS הומניזציה וריאנטית in vivo, התומכים בפוטנציאל לניסויים קליניים בגידולים שפירים המונעים על ידי RAS.

בתאים ראשוניים, מינון בודד של siRNA גורם למפל אפופטוטי, בניגוד לטיפול במעכב MEK. SiRNA8 הראה השפעה מינימלית מחוץ למטרה על RNAseq בתאי HCT116.

בתרביות תאי CMN ראשוניות, siNRASQ61K עיכב את ייצור התעתיק הוריאנטי והפחית את רמות ה-mRNA של וריאנט NRAS אלל מבלי להשפיע על סמנים מלנוציטיים קונבנציונליים.

ניתוח טראנסקריפטומי גילה עלייה משמעותית ב-ERN1, משתתף קריטי במסלולים דומים. עם זאת, הביטוי של גנים אחרים הקשורים ללחץ הקשור ל-ER (כגון ATF-4, 6, GRP78 ו-EIF2AK3) לא השתנה, מה שמעיד על כך שמתח הרשת האנדופלזמי אינו הסיבה העיקרית לאפופטוזיס הנגרמת על ידי סיNRASQ61K.

החוקרים מצאו כי הגנה מפני אפופטוזיס היא קריטית להישרדותם של ניבים מלנוציטיים המונעים על ידי NRAS וכי טיפול עם siRNA ספציפי לאלל יכול לבטל הגנה זו. הממצאים עשויים להוות את הבסיס למניעת סרטן, במיוחד עבור אנשים בסיכון גבוה.

siRNA ממוקד עשוי לשמש כאבן יסוד לחקירות טיפוליות עבור גידולים לא ממאירים המונעים על ידי RAS, להדגים את הפוטנציאל לפתרון CMN אצל אנשים ופרדיגמה לטיפול מונע בסרטן בגידולים שפירים המיוצרים על ידי RAS אונקוגני.

המחקר מציע שימוש בטיפולים וריאציות ספציפיים לאללים ומיקוד קולטן כדי למזער מינון. טרמטיניב הפחית את צמיחת תאי CMN תוך יום מהטיפול, אך לא גרם לאפופטוזיס לאורך זמן, בין אם ניתן לבד או בשילוב עם ביקורת siRNA.

דילוג לתוכן