המחקר נועד לחשוף את הבסיס האימונולוגי של חוקה של טאנשי (פלגם)-סוג תת-בריאות ברפואה סינית מסורתית (TCM)-שימוש ברצף RNA חד-תאי (scrNA-seq) של תאים מונונוקלאר דם היקפי (PBMC). TCM מסווג אנשים לתשע חוקים, כאשר טנשי קשור להפרעות מטבוליות כמו סוכרת ומאופיינת בתסמינים כמו כבדות, פליטות בטן ועור שמנוני. על ידי ניתוח PBMCs של טאנשי ואנשים שאינם טנשי, המחקר מבקש לגשר על התיאוריה החוקתית של TCM עם אימונולוגיה מולקולרית מודרנית, ומספק בסיס מדעי לתפיסת הרפואה המונעת של TCM.
13 מתנדבים בוגרים גויסו, כולל ארבעה עם חוקה של טנשי (קלע ≥40 באמצעות סקר בן 8 שאלות) ותשעה בקרות שאינן טאנשי. PBMCs היו מבודדים מדמם, ו- scrNA-seq בוצע באמצעות פלטפורמת הגנומיקה של 10x, ויצר נתונים טרנסקריפטיים ברזולוציה גבוהה עבור 51,196 תאים. ניתוחי ביואינפורמטיקה, כולל אשכול תאים באמצעות UMAP, זיהו 15 תת -תאים חיסוניים, כמו תאי B, תאי T, מונוציטים ותאים דנדריטים. ניתוח השוואתי חשף הבדלים משמעותיים בהרכב תאי החיסון בין הקבוצות.
ממצאי המפתח כוללים ירידה בולטת בתאי T (MAIT) הקשורים לרירית בקרב אנשים טנשי, שאושרו על ידי מיון תאים המופעלים בקרינה (FACS) בקבוצת אימות עצמאית של 10 משתתפים נוספים. תאי MAIT, קריטיים לחסינות מולדת, כימותו באמצעות ציטומטריה זרימה רב-צבעונית המכוונת ל- CD3, TCR Vα7.2 ו- CD161. במקביל, הנבדקים של טאנשי הראו שיעור מוגבר של מונוציטים CD14+ קלאסיים ומגמה לירידה במונוציטים CD16+ לא קלאסיים, כאשר FACS הראו ירידה משמעותית ביחס התא CD16+ ביחס לתאי CD14+.
ניתוחים טרנסקריפטיים שזוהו גנים המובעים באופן דיפרנציאלי (DEGS) הקשורים למסלולי דלקת מוגברים ב- PBMCs Tanshi. העשרה של גנים אונטולוגיה (GO) חשפה ויסות של איתות TNFα-NFκB, רכיבי מסלול JAK-STAT (למשל, IL-1β, SOCS3) ותגובות אינטרפרון (EG, IRF1, IFI44L). GSEA הדגיש עוד יותר את ההפעלה של "hallmark_tnfa_signaling באמצעות NFKB" ו- "תגובת אינטרפרון" מערכות גנים במונוציטים קלאסיים ותאי MAIT. בנוסף, גנים הקשורים להיפוקסיה ואפופטוזיס הועשרו, ועלולים להיות קשורים לדום נשימה בשינה – קומורבידיות נפוצה בחוקה טנשי הגורמת להיפוקסיה לסירוגין.
המחקר מאמת את התיאוריה החוקתית של TCM באמצעות עדויות מולקולריות, ומדגים כי אנשים טנשי מציגים מצב דלקתי כרוני בדרגה נמוכה ופרשת חיסון. הפחתה בתאי MAIT, שקשורים בעבר לתוצאות COVID-19 חמורות, מתיישרת עם תצפיות קליניות על הרגישות הפוטנציאלית של נבדקי טנשי למחלות זיהומיות. העלייה במונוציטים הקלאסיים עשויה לתרום לדלקת מטבולית, לתמיכה בקשר בין חוקה טנשי לתסמונת המטבולית.
הפרופילציה ברזולוציה גבוהה של SCRNA-SEQ מאפשרת אפיון של שינויים ספציפיים מסוג תאים, ומתגברים על מגבלות של רצף RNA בתפזורת על ידי פתרון ההטרוגניות באוכלוסיות PBMC. אימות FACS מבטיח את האמינות של ממצאי scRNA-seq, במיוחד לכימות תאי MAIT, הדורש אסטרטגיות שער רב-שלביות כדי לא לכלול זיהום תאי γδ. שילוב אבחון TCM עם טכנולוגיות אומיקס מודרניות קובע מסגרת לתרגום מושגים מסורתיים לתובנות ביו -רפואיות ניתנות לפעולה.
מעבר לחוקה של טנשי, גישה זו מביאה הבטחה לחקר חוקה אחרת של TCM ומעקב אחר תגובות טיפוליות להתערבויות TCM. לדוגמה, scrNA-seq של PBMCs לפני ואחרי טיפול צמחי מרפא יכול היה להבהיר כיצד TCM מווסת את מסלולי החיסון. יתרה מזאת, שילוב scRNA-seq עם מטבוליומיקה, מיקרוביומיקס ונוירופיזיולוגי עשוי לחשוף את המנגנונים ההוליסטיים העומדים בבסיס התיאוריות הרגולטוריות של "גוף הנפש" של TCM, כמו האינטראקציה בין מערכת העצבים האוטונומית לחסינות המודגשת במחקר דיקור.
לסיכום, מחקר זה מספק תמונת מצב מולקולרית של הנוף החיסוני של חוקה טנשי, וקושרת את הפילוסופיה המונעת של TCM למסלולי ביולוגיים קונקרטיים. על ידי הפגנת התועלת של SCRNA-Seq בפענוח תיאוריה חוקתית TCM, המחקר פותח דרכים חדשות לרפואה בהתאמה אישית, שם פרופיל חיסון יכול ליידע אסטרטגיות התערבות מוקדמות לסיכוני בריאות ספציפיים לחוקה. כיוון שכך, היא מגשרת על חוכמה עתיקה עם מדע עכשווי, ומציעה בסיס מונע נתונים לקידום TCM בעידן הרפואה המדויקת.
